问题描述：
（2011•上海）回答下列有关基因工程的问题．（1）基因工程中使用的限制酶，其特点是______．
如图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因．
（2）将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X-1混合连接，连接后获得的质粒类型有______．（可多选）
A．X-1
B．X-2
C．X-3
D．X-4
（3）若将上图所示X-1、X-2、X-3、X-4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上．在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有______、______．
（4）如果X-1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X-2（Tcr基因的长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为______对碱基．
（5）若将外源的Tcr基因两端用E2切开，再与用E2切开的X-1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X-4的细胞数与含X-1的细胞数之比为13，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？______．原因是______．
最佳答案： （1）基因工程中使用的限制酶，其特点是特异性地识别和切割DNA．
（2）用限制酶E1切开质粒X-1后，质粒X-1暴露出两个粘性末端，APr被切下．两端用E1切开的Tcr基因含有与上述切割后的质粒X-1，Apr含有相同的粘性末端，混合后可形成X-1、X-2和X-3．
（3）含质粒X-1的细胞可在含青霉素培养基上生长，含质粒X-2的细胞可在含四环素培养基上生长；含质粒X-3的细胞不含抗性基因，不能在两种培养基上生长；不含有质粒的细胞也不能在两种培养基上生长．
（4）X-2的长度为1200+3550=4750，用E2酶切后质粒由环状变为链状．
（5）两段DNA粘性末端相同，DNA连接酶对DNA片段没有选择性，故增大DNA连接酶用量不能提高上述比例．
故答案为：
（1）特异性地识别和切割DNA
（2）ABC
（3）无质粒的细胞 含X-3的细胞
（4）4750
（5）不能 DNA连接酶对DNA片段没有选择性/两段DNA末端相同
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