胃癌中微淋巴管密度检测的意义

【摘要】  目的 利用淋巴管内皮生长因子受体3(VEGFR3)检测胃癌组织内微淋巴管密度(MLD)，研究其与增殖期细胞核抗原(PCNA) 及临床因素之间的相关性。方法 采用免疫组化法，以VEGFR3 (又称FLT4) 为标记物，检测60例胃癌淋巴结转移组织内MLD与增殖期细胞核抗原(PCNA) 蛋白及临床病理因素之间的相关性。结果 胃癌淋巴结转移组织VEGFR3阳性率和MLD明显增高;胃癌组织中MLD与PCNA之间呈正相关。结论 VEGFR3可促进肿瘤微淋巴管生成,VEGFR3和MLD的表达可能与胃癌的淋巴结转移相关。

【关键词】  胃癌;淋巴管内皮生长因子受体3;微淋巴密度

　　ABSTRACT：Objective To detect the lymphatic microvessel density(MLD) in gastric cancer by lymphatic endothelial growth factor receptor3(VEGFR3) and to study the correlation between the proliferating cell nuclear antigen(PCNA) protein and clinicopathological factors.Methods VEGFR3 was used as a marker to detect the expression of MLD and PCNA protein in 60 cases of gastric cancer tissues by immunohistochemical method.Results The positive rate of VEGFR3 and MLD were significantly increased in gastric cancer with lymph node metastasis,and there was a positive correlation between.MLD and PCNA in gastric cancer.Conclusion VEGFR3 might promote microtumor lymphangiogenesis,and VEGFR3 and the expression of MLD may be related to lymph node metastasis of gastric cancer.

　　KEY WORDS：Gastric cancer;Lymphatic endothelial growth factor receptor 3;Lymphatic microvessel density

　　肿瘤的侵袭和转移是患者死亡的重要原因之一。胃癌早期以淋巴转移为主，晚期才发生血行转移。尽管淋巴管在胃癌转移中的作用非常明确，但因长期未发现明确的淋巴管内皮标记物和淋巴管生成因子，使人们对胃癌淋巴管生成(lymphangiogenesis)的研究相对滞后于胃癌血管生成(angiogenesis)。淋巴管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor3，VEGFR3)是VEGF基因家族成员VEGFC的受体，主要在淋巴管内皮细胞和单核细胞系造血细胞中表达。因此，VEGFR3可作为淋巴管内皮细胞的标记物，以区别于血管内皮细胞[1,2]。本实验采用免疫组化法和图片分析法，检测胃癌组织中VEGFR3和微淋巴管密度(microlymphatic density，MLD)的表达并探讨其与增殖期细胞核抗原( proliferating cell nuclear antigen，PCNA)及临床病理因素之间的相关性。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本来源

　　选择1999～2002年在咸宁学院附属 论文检测天使-免费论文检测软件http://www.jiancetianshi.com
第一医院手术切除的胃癌标本共60例，并取距离癌组织>5cm的正常组织作对照。患者中男48例，女12例，年龄32～76岁，平均58岁。标本均经10%的中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。

　　1.2 实验试剂与材料

　　兔抗人VEGFR3多克隆抗体、小鼠抗人PCNA单克隆抗体、即用型链酶亲合素生物素过氧化物酶复合物试剂盒。试剂盒组成(福州迈新公司)：A：内源性过氧化酶阻断剂(无色)，B：动物非免疫血清(羊，蓝色)，C：生物素标记的羊抗鼠/兔IgG(黄色)，D：链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(红色)。试剂盒不含酶底物显色剂及复染剂。

　　1.3 方法

　　按试剂盒说明书方法操作。

　　1.4 结果判断

　　VEGFR3蛋白主要表达于胃癌细胞及正常胃黏膜上皮细胞的胞质和(或)细胞膜上。测微淋巴管密度(MLD) ,先在低倍镜(SP×200) 视野下观察，选择VEGFR3 阳性细胞最多的3个视野, 然后分别在高倍镜(SP×400) 视野下计数。染色的单个游离内皮细胞(排除肿瘤细胞或其他基质细胞)计为1条微淋巴管，成簇状相连或形成管状结构的细胞团计为1条微淋巴管，有血管平滑肌的管状结构不计入内。取其中计数最多的1个高倍镜视野内的微淋巴管数作为该组织的MLD。

　　PCNA 采用免疫反应半定量评分[3]。按染色强度评分: 0分为无染色,1分为染色较弱(浅黄色) , 2分为中等强度染色(棕黄色) , 3分为强染色(棕褐色)。按染色细胞的百分比评分:0分为无阳性细胞,1分为染色细胞<10%, 2分为染色细胞在11%～50%之间, 3分为染色细胞在51%～80%之间, 4分为染色细胞>80%。两种评分相乘即得出免疫反应评分, 范围在0～12分之间。

　　1.5 统计学处理

　　对MLD、PCNA行KolmogorovSmirnov Z检验。不符合正态分布，故用中位数(四分位间距)表示，采用MannWhitney U检验;相关性检验采用Spearman等级相关及单因素Logistic回归分析，给出OR 值( 95%可信区间)。所有统计采用SPSS10.0软件进行计算。

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　　2 结 果

　　2.1 胃癌和正常组织中MLD检测

　　通过免疫组化法染色,检测到胃癌和胃正常组织中MLD分别为6(4.00～8.00)和3(2.00～5.75)，胃癌组织中MLD明显增高(U=201.5，P=0.01)。(图1，2)图1 胃癌中MLD的阳性表达 (SP×200)图2 胃癌中VEGFR3的阳性表达 (SP×400)

　　2.2 胃癌组织中MLD 与PCNA 之间的相关性MLD 与PCNA之间有相关性(r=0.26，P<0.05)。

　　2.3 胃癌组织中MLD与临床病理因素之间的相关性

　　胃癌组织中MLD与患者淋巴结转移状况有相关性(r=0.33,P<0.05), 与其他临床病理因素之间无相关性,见表1。表1 胃癌组织中MLD 与临床病理因素之间的相关性

　　2.4 胃癌组织中MLD 对淋巴结转移影响的单因素Logistic 回归分析

　　按中位数将MLD 分成高低两组，行单因素Logistic 回归分析显示MLD 对淋巴结转移有影响，高MLD组发生淋巴结转移的风险是低MLD 组的3.51倍( 95%可信区间为1.20～10.24，P= 0.02)。

　　3 讨 论

　　近来研究表明，癌细胞可以诱导肿瘤内淋巴管生成，并通过侵入淋巴管而发生区域淋巴结转移[4]。区域淋巴结转移是胃癌患者重要的预后因素，也是临床上选择术后辅助化疗或放疗的重要标准。VEGFR3是VEGF基因家族成员VEGFC 的受体,作为VEGFC 的受体, VEGFR3主要在淋巴管内皮细胞和单核细胞系造血细胞中表达, 因此可作为淋巴管内皮细胞的标记物, 以区别于血管内皮细胞[1，2]。多数学者研究认为, MLD与胃癌区域淋巴结转移有相关性[5，6]，可能是因为MLD 高则癌细胞更易侵犯淋巴管[6]。但有少数学者研究认为MLD与区域淋巴结转移无相关性[7，8]。至于MLD 是否与胃癌患者预后有关，研究报道不多，结果也不一致[5, 6]。本研究以VEGFR3 抗体为标记物检测发现，胃癌组织中MLD明显高于正常组织，癌组织中MLD与淋巴结转移状况有相关性，高MLD 组发生淋巴结转移的风险是低MLD组的3.5倍。因尚未取得完整的随访资料，无法判断MLD的预后价值，有待今后进一步研究。另外，本研究发现胃癌组织中MLD与PCNA 之间呈正相关，提示胃癌淋巴管生成活性强则胃癌细胞的增殖活性也较强。

【参考文献】
  　　[1]Skobe M,Hawighorst T,Jackson DG,et al.Induction of tumorlymphangiogenesis by VEGFC promotes breast cancer metastasis[J].Nat Med,2001,7(2):192

　　[2]Jussila L,Valtola R,Partanen TA,et al.Lymphatic endotheliumand Kaposis sarcoma spindle cells detected by antibodies againstthe vascular endothelial growth factor receptor3[J].Cancer Res,1998,58(8):1599

　　[3]许良中,杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志,1996,6:229

　　[4]Stacker SA,Caesar C,Baldwin ME,et al.VEGFD promotes themetastatic spread of tumor cells via the lymphatics[J].Nat Med,2001,7(2):186

　　[5]Nakamura Y,Yasuoka H,Tsujimoto M,et al.Lymph vesseldensity correlates with nodal status, VEGFC expression, andprognosis in breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat, 2005,91(2):125

　　[6]Schoppmann SF,Bayer G,Aumayr K,et al.Prognostic value oflymphangiogenesis and lymphovascular invasion in invasivebreast cancer[J].Ann Surg,2004,240(2):306

　　[7]Longatto Filho A,Martins A,Costa SM,et al.VEGFR3expression in breast cancer tissue is not restricted to lymphaticvessels[J].Pathol Res Pract,2005,201(2):93

　　[8]Jacquemier J,MathoulinPortier MP,Valtola R,et al.Prognosis of breastcarcinoma lymphagenesis evaluated by immune histochemicalinvestigation of vascularendothelialgrowthfactorreceptor 3[J].Int J Cancer,2000,89(1):69

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